厭氧菌是地球上數量最多、物種最豐富的細菌,但目前人們對它知之甚少。它們對氧氣敏感、生長條件苛刻,不容易培養分離。要培養厭氧菌,必須創造一個無氧的環境。常用的厭氧培養方法有很多種,如皰肉培養基、產氣袋法、厭氧手套箱法等。
一、皰肉培養基法
皰肉培養基法是最簡單的厭氧培養法之一,無需特殊設備。將皰肉和肉湯裝入大試管,在液面加入凡士林封閉,從而造成無氧環境。在使用前最好將裝有培養基的試管沸水浴10-20 min,以使培養基中溶解的氧釋放出來。
二、產氣袋法
該方法不需要特殊設備,操作簡單,使用方便。原理為硼氫化鉀(鈉)和水反應生成氫氣,氫與密封袋中的氧氣在鈀粒的作用下,氫氣和氧氣反應生成水,從而除去氧氣,建立起無氧小環境。
三、厭氧手套箱法
厭氧手套箱是一個密閉的大型箱,一般前部是有機玻璃做的透明面板,板上裝有兩個手套,可通過手套在箱內進行操作。厭氧手套箱可調節溫度,本身是孵育箱或孵育箱即附在其內。
四、智能厭氧微生物培養系統
這是目前應用較廣泛的一種厭氧培養方法,適用于專業微生物實驗室,可迅速建立厭氧環境。標本接種后,將平板放入厭氧罐,用真空泵抽出罐中空氣,充入高純氣體,連續反復3次,最后充入70%的N、20% H、10% CO (或20% CO、80% H),罐中需放入催化劑鈀粒,催化罐中殘余的O和H化合成水。
對于厭氧微生物來說,穩定可靠的培養方法是保證后續檢測結果準確的基礎。
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